Základní mikrobiologický rozbor vody

Prezentace na téma: "Základní mikrobiologický rozbor vody"— Transkript prezentace:

1 Základní mikrobiologický rozbor vody
Mgr. Petra Straková Podzim 2014

2 Voda Přirozené stanoviště mikroorganismů
Sladká/slaná voda, i extrémní podmínky Prostředek pro transport živin – příjem/vylučování, veliký rozmach průmyslu, vysoká koncentrace lidí, chemizace v zemědělství – znečištění !!! Vždy určité množství mikroorganismů Zastoupení vlivem různých faktorů kolísá

3 Sladká voda Nejpřirozenější
Zastoupení závislé na zdrojích N, C a na přítomnosti kyslíku 3 skupiny mikroorganismů: autochtonní půdní střevní

4 Autochtonní mikroorganismy
Přirození obyvatelé Složení stálé a stabilní Chromobacterium, Spirillum

5 Půdní mikroorganismy Do vody se dostanou splavováním Pobřeží
Počet závisí na množství organické hmoty Bacillus, Streptomyces

6 Střevní mikroorganismy
Fekální znečištění Krátkodobý výskyt (i patogenů) Enterobacteriaceae (E.coli, Salmonella, Shigella), Streptococcus, Enterococcus

7 Diagnostika 1) Psychrofilní bakterie 2) Mezofilní bakterií
3) Koliformní bakterie 1+2 = obecné znečištění 3 = fekální znečištění

8 Psychrofilní bakterie
Optimální teplota do 20 °C Indikace přítomnosti organických látek rychle rozložitelných bakteriemi Stanovení jen v případě, že vodu povrchovou chceme převést na pitnou Pitná voda: <200 bakterií na 1ml Studny, povrchové vody: <500 bakterií na 1 ml

9 Mezofilní bakterie Rostou při teplotě 37 °C
Indikace znečištění mikroflórou teplokrevných živočichů a člověka I patogenní organismy !! Pitná voda: <20 bakterií na 1 ml Studna, povrchové vody: <100 bakterií na 1 ml

10 Fekální znečištění jako indikace se považuje průkaz E.coli a intestinálních enterokoků Koliformní bakterie – obyvatelé tlustého střeva, G- tyčky (nejčastěji E.coli) Když určíme fekální znečištění, musíme rozbor rozšířit o stanovení střevních patogenů (lac- Shigella, Salmonella; lac+ E.coli) G+ - Enterococcus – čerstvé fekální znečištění exotická zajímavost: Vibrio, Legionella, Aeromonas Pitná voda: 0 bakterií na 1 ml Studna, povrchové vody: 0 bakterií na 1 ml

11 Cíl cvičení Stanovení celkového počtu bakterií – TYEA půda (20 °C, 37 °C) Stanovit indikátorové skupiny bakterií – ENDO, mFC, SB agar Posouzení kvality vody – místo odběru, včasný rozbor, stanovení indikátorů (ne všechny MO), státní normy

12 Půdy ENDO – selektivně diagnostická půda, fuchsin – inhibuje G+, koliformní bakterie pak červené zbarvení (lac+), lac- růžové kolonie (obligátní paraziti – Yersinia) Kultivace při 37 °C

13 Půdy mFC – selektivně diagnostická půda, soli inhibují G+, lac+, termotolerantní bakterie – modře zbarvené Kultivace při 44 °C Teplotní test na znečištění

14 Půdy SB agar (Slanetz-Bartley) – selektivní pro enterokoky – azid sodný, indikátor TTC – červeně zbarvené kolonie Kultivace 37 °C/44 °C

15 Postup (ve dvojicích) 1) Odběr – do sterilních lahví, sterilita práce, zpracování ihned nebo krátkodobě v lednici 2) PITNÁ VODA – neředěný vzorek a 10-1 POVRCHOVÁ VODA – ředění 10-1 a 10-2 POŘÁD PROMÍCHÁVAT VODU!!! 0,5 ml 0,5ml 10-1 10-2 VZOREK 4,5 ml fosfátového pufru

16 NEJDŘÍV POPSAT MISKY ZESPODU !! (jméno, půda, teplota, ředění)
Postup (ve dvojicích) 3) TYEA – 2 misky v každém ředění 20 °C, misky v každém ředění 37 °C (=8) - 200 µl pipetovat na misku a rozhokejkovat 4) ENDO, SB, mFC – 2 misky v každém ředění (=4) - 200 µl pipetovat na misku a rozhokejkovat NEJDŘÍV POPSAT MISKY ZESPODU !! (jméno, půda, teplota, ředění)

17 Půdy, kultivace a hodnocení
Indikátorová skupina Půda Kultivace Barva kolonií Všechny MO TYEA 20, 37°C Všechny kolonie Koliformní MO ENDO 37 °C Sytě červené s kovovým leskem Termotolerantní MO mFC 44 °C Modré kolonie enterokoky SB Červené kolonie

18 Hodnocení TYEA – spočítáme všechny narostlé kolonie
- spočítáme průměr u daného ředění, např.: 21 x 101 x 10 Počet kolonií – průměr ze 2 misek při daném ředění Hodnota pro celý 1 ml Hodnota ředění (kladný index)

19 Hodnocení ENDO agar – červené s kovovým leskem (E.coli), ostatní lac+ - tmavě červené, lac- - růžové/průhledné kolonie SB agar – červené, tmavě červené kolonie mFC – fialové až tmavě modré kolonie VÝSLEDKY POROVNAT S NORMAMI !!

20 Problémy rozboru Odběr ! Kontaminace, soustavné míchání, ředění
Očkování média – staré, kontaminované médium, aseptická práce, vliv inkubační doby a teploty Odečet výsledků – u pitné vody –KAŽDÁ kolonie se počítá , u povrchové vody – řeší se počet kolonií i ty podezřelé !