DNA diagnostika.

Prezentace na téma: "DNA diagnostika."— Transkript prezentace:

1 DNA diagnostika

2 Co se detekuje ? Monogenní a polygenní dědičné choroby
Některé typy nádorů Progrese choroby během léčby Identifikace lidí ve forenzní medicíně HLA-typizace v případě transplantace Prevence - vyšetření: - preimplantační - prenatální - presymtomatické

3 DNA polymorfizmus  Variabilita sekvence DNA
mezi rozdílnými jedinci téhož druhu Alelový polymorfizmus fyziologická funkce, s frekvencí > 1% predispozice k polygenním chorobám Mutace patologická funkce, s frekvencí < 1% příčina monogenních chorob

4 Zdroje nukleových kyselin
DNA určitého genu – všechny jaderné buňky RNA určitého genu - jenom ty buňky, kde se daný gen exprimuje

5 PCR (namnožení části DNA) vizualizace výsledku v gelu
Princip testování izolace DNA PCR (namnožení části DNA) + další analýzy vizualizace výsledku v gelu

6 Náplň třítýdenních praktik
1. praktikum: Izolace vlastní DNA 2. praktikum: PCR - namnožení genů CFTR a HFE 3. praktikum: RFLP - restrikční štěpení genu HFE

7 Nejčastější mutace Cystické fibrózy : gen CFTR, na 7. chromozomu mutace delta F508 Hemochromatózy : gen HFE, na 6. chromozomu mutace C282Y

8 Mutace delta F508 Normální sekvence
DNA ´ … AAT ATC ATC TTT GGT GIT … 3´ Protein Asn Ile Ile Phe Gly Val Pozice Mutovaná DNA DNA ´ … AAT ATC AT T GGT GIT … 3´ Protein Asn Ile Ile Gly Val

9 Mutace C282Y Normální DNA 5 ´......G / TGC….. 3´ 3´…. C / ACG….. 5´
C – Cys – Cystein (TGC) na pozici 282 v proteinu Mutovaná DNA 5 ´......G / TAC….. 3´ 3´…. C / ATG….. 5´ Y – Tyr – Tyrosin (TAC) na pozici 282 v proteinu

10 Charakteristika DNA diagnostiky
Detekce určitého polymorfizmu daného predispozičního genu CÍLENÉ ANALÝZY KOMPLETNÍ ANALÝZY

11 Cílené analýzy Lokalizace a celá sekvence genu je známá
Mutace genu je známá Vyšetření členů rodiny není nutné

12 Kompletní analýzy Lokalizace a celá sekvence genu je známá
Mutace genu jsou neznámé Vyšetření členů rodiny je nezbytné

13 Detekce polymorfizmu určitého genu
Cílené analýzy: PCR se sekvenčně specifickými primery (CFTR delta F508) PCR s obecnými primery + 1) RFLP s restrikčními enzymy (Restriction Fragment Length Polymorphism) (HFE C282Y) + 2) hybridizace s DNA próbami Kompletní analýzy: DNA sekvenování