Stáhnout prezentaci
Prezentace se nahrává, počkejte prosím
1
Průtoková cytometrie základní princip a klinické využití
Brzová Petra
2
Průtoková cytometrie (flow cytometry)
Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým paprskem Identifikace různých buněčných typů uvnitř smíšené populace, analýza jednotlivých subpopulací v rámci jedné populace Rychlá, přesná a reprodukovatelná metoda, umožňuje současné měření několika parametrů až na buněk za 1 sekundu
3
Základní komponenty průtokového cytometru:
1. Fluidní systém Flow cell (průtoková komůrka) Sheat fluid(nosná kapalina ) Hydrodynamická fokusace
4
Základní komponenty průtokového cytometru:
2. Optický systém Laserový paprsek Forward scatter (FSC) Side scatter (SSC) emitované fluorescenční signály
5
Imunofenotypizace typizace jednotlivých buněčných populací za využití reakce antigen-protilátka. reakce je vizualizována označením protilátky fluorochromem (FITC,PE,PC5)
6
Základní komponenty průtokového cytometru
3. Počítačový systém (workstation) Výstupem měření jsou pak výsledky v grafické a číselné formě: jednoparametrové histogramy dvouparametrové histogramy zastoupení buněk nesoucí daný antigen v procentech
7
Klinické využití průtokové cytometrie
Imunofenotypizace leukemií a lymfomů DNA analýza Funkční vyšetření leukocytů Stanovení intracelulárního vápníku Diagnostika defektů imunity Cytometrické vyšetření solidních nádorů Diagnostika a monitorování autoimunních chorob Transplantační imunologie
8
Možnosti využití FCM na našem pracovišti
Vyšetření periferní krve: Lymfocytóza (odlišení reaktivní a monoklonální lymfocytózy) Pancytopenie (vyloučení HCL, PNH) Monoklonální gamapathie Akutní leukémie (odlišení AML od ALL) Základní imunologické vyšetření (stanovení početního a procentuálního zastoupení B-ly, T-ly subpopulací, NK-buněk, hodnocení imunoregulačního indexu)
9
Možnosti využití FCM na našem pracovišti
Vyšetření kostní dřeně: Podobné indikace jako vyšetření periferní krve Vyšetření lymfatické uzliny: Ve většině případu umožňuje rychlou diagnostiku případného postižení lymfomem, odlišení od reaktivní lymfatické uzliny či postižení metastatickým karcinomem, vyšetřujeme vždy v kombinaci s cytologickým vyšetřením otisku LU Vyšetření výpotků a likvoru: K vyloučení postižení lymfoproliferativním onemocněním
10
Základní panely vyšetření na našem pracovišti
Základní panel – vyšetření základních lymfocytárních subpopulací: B-lymfocyty T-lymfocyty – helper T-ly a supresorové T-ly NK- buňky Stanovení imunoregulačního indexu (CD4/CD8) Určení zastoupení povrchových imunoglobulinových řetězců kappa/lambda na B-lymfocytech = vyloučení klonálních B-lymfocytů
11
Základní panely vyšetření na našem pracovišti
Panel B-lymfoproliferací Při potvrzení monoklonální B-ly populace nebo vysokém podezření na B-lymfoproliferaci Blíže charakterizuje imunofenotyp klonálních B-lymfocytů Umožňuje bližší zařazení B-lymfoproliferace Panel T-lymfoproliferací Při významné T-lymfocytóze s podezřením na T-lymfoproliferativní onemocnění
12
Základní panely vyšetření na našem pracovišti
Panel akutních leukémií U pacientů s podezřením na AL Rozlíšení základních subtypů AL (ALL, AML) Bližší charakteristika subtypů AL a zařazení dle FAB klasifikace Další panely speciálních vyšetření Mnohočetný myelom B-CLL PNH
13
Výsledkový list FCM
14
Způsob odběru a přepravy materiálu k FCM vyšetření
Vyšetření se provádí denně (mimo So, Ne) Periferní krev – odběr jako KO Kostní dřeň – speciální zkumavka s antikoagulačním roztokem LU – odebrána do gázy navlhčené ve FR Vzorky doručit do laboratoře nejpozděj do 10:00 z důvodu následného zpracování Dostupnost výsledku vyšetření je do 2 hodin Výsledek možno zjistit telefonicky na kl. 428
15
Pracovní postup při imunofenotypizaci průtokovou cytometrií
Stanovení buněčnosti vyšetřované suspenze Pipetování vzorku Značení monoklonální protilátkou Inkubace Lýza erytrocytů Promytí Resuspenze v pufru PBS Analýza (měření)
16
DĚKUJI ZA POZORNOST
Podobné prezentace
© 2024 SlidePlayer.cz Inc.
All rights reserved.