Poškození DNA účinkem ionizujícího záření N. Stoklasová M. Caha G. Krejčíková M. Bulínová.

Prezentace na téma: "Poškození DNA účinkem ionizujícího záření N. Stoklasová M. Caha G. Krejčíková M. Bulínová."— Transkript prezentace:

1 Poškození DNA účinkem ionizujícího záření N. Stoklasová M. Caha G. Krejčíková M. Bulínová

2 Obsah Základní informace Základní informace Materiály a metody Materiály a metody Použité chemikálie Použité chemikálie Příprava vzorků Příprava vzorků Příprava gelu Příprava gelu Ozařování Ozařování Elektroforéza a zobrazení gelu Elektroforéza a zobrazení gelu Výsledky a diskuze Výsledky a diskuze Poděkování a citace Poděkování a citace

3 Základní informace Plasmidová DNA Plasmidová DNA Gamma záření: přímé a nepřímé poškození Gamma záření: přímé a nepřímé poškození Formy DNA: smotaná, kruhová, linearní Formy DNA: smotaná, kruhová, linearní Záporný náboj DNA: putuje v gelu Záporný náboj DNA: putuje v gelu Barvivo viditelné pod UV, analýza na PC Barvivo viditelné pod UV, analýza na PC

4

5 Materiály a metody Použité chemikálie Použité chemikálie Autoklávovaná destlilovaná voda Autoklávovaná destlilovaná voda Plasmidy pcDNA3, pBR, pBS Plasmidy pcDNA3, pBR, pBS 100 mM fosfátový pufr pH 7.9 100 mM fosfátový pufr pH 7.9 Agarosa Agarosa 50x TAE pufr pH 8 50x TAE pufr pH 8 Fluorescenční barvivo SYBR Green I Fluorescenční barvivo SYBR Green I Nanášecí (loading) pufr Nanášecí (loading) pufr

6 Příprava vzorků Příprava vzorků V (vzorku) = 100 µl V (pufru) = 10 µl m (DNA) = 100 ng

7 Příprava gelu Příprava gelu 1% gel m (agarosa) = 0,4 g V (0,5 x TAE) = 40 ml

8 Ozařování Ozařování γ zdroj záření 60 Co 2 Gy -> t = 2 min 52 s

9 Elektroforéza a zobrazení gelu Elektroforéza a zobrazení gelu V (nanášecí pufr) = 2 μl U = 100 V t = 90 min

10 Výsledky a diskuze Image Quant

11 Výsledky a diskuze

12 Poděkování Ing. Viktorii Madhusudhan Štísové, PhD. Ing. Viktorii Madhusudhan Štísové, PhD. Ing. Kateřině Pachnerové Brabcové, PhD. Ing. Kateřině Pachnerové Brabcové, PhD. Fakultě jaderné a fyzikálně inženýrské ČVUT Fakultě jaderné a fyzikálně inženýrské ČVUT Oddělení dozimetrie záření Ústavu jaderné fyziky Oddělení dozimetrie záření Ústavu jaderné fyziky týmu Týdne vědy týmu Týdne vědy

13 Citace [1]Bray A., Lewis J., Walter R.R.: Základy buněčné biologie, 2. vydání, Espero Publishing, s.r.o., 1998 [1]Bray A., Lewis J., Walter R.R.: Základy buněčné biologie, 2. vydání, Espero Publishing, s.r.o., 1998 [2]Sambrook J., Russell D.W.: Molecular Cloning, 3. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001 [2]Sambrook J., Russell D.W.: Molecular Cloning, 3. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001 [3]Hall E.J., Giaccia A.J., Radiobiology for the Radiologist, 6. vydání, Lippincott Williams and Wilkins, 2006 [3]Hall E.J., Giaccia A.J., Radiobiology for the Radiologist, 6. vydání, Lippincott Williams and Wilkins, 2006