Laboratorní metody 2 Kurs Imunologie II.

Prezentace na téma: "Laboratorní metody 2 Kurs Imunologie II."— Transkript prezentace:

1 Laboratorní metody 2 Kurs Imunologie II

2 Etiologická diagnostika infekčních chorob
Průkaz původce choroby kultivační průkaz mikroskopický průkaz průkaz antigenů či nukleové kyseliny Průkaz reakce imunitního systému průkaz protilátek proti původci - sérologie průkaz specifických Th1 lymfocytů

3 ? Základní problém Antigen Imunitní systém Protilátky Imunologie
Mikrobiologie Antigen ? Imunitní systém Protilátky

4 Základní teze místo průkazu původce nákazy prokazujeme reakci části imunitního systému nevíme, zda imunitní systém reaguje dle našich představ (interpretační problémy nevíme, zda metoda zachycuje to, co hledáme (technologické problémy)

5 Schéma tvorby protilátek

6 Vliv složení antigenu

7 Nepřímá („bystander“) aktivace
cytokinový signál a částečná aktivace receptorů může aktivovat B lymfocyty s jinou specificitou produkce protilátek proti jinému agens než které vyvolalo onemocnění

8 Schéma tvorby protilátek

9 Revmatoidní faktor Autoprotilátky proti vlastním IgG (převážně ve třídě IgM) mohou vyvolávat falešně pozitivní nález zejména IgM proti danému agens nutná pozitivita IgG frekvence v běžných vzorcích cca 1 %

10 Revmatoidní faktor (schéma)

11 Vyšetření avidity protilátek
vychází z afinní maturace protilátek během sekundární odpovědi přináší stejnou informaci jako vyšetření IgM/IgG (isotypový přesmyk) nejednoznačné výsledky

12 Falešně negativní výsledky
vyšetření je provedeno v začátcích rozvoje choroby pro imunitu k danému mikrobu nejsou protilátky podstatné mikrob napadá buňky imunitního systému pacient trpí poruchou tvorby protilátek vznik imunokomplexů

13 Falešně pozitivní výsledky
protilátky přetrvávají roky či celoživotně u gravidních žen a u pacientů s postižením jater či celkovým metabolickým rozvratem protilátky se mohou začít tvořit i při reakci imunitního systému na jinou infekci (nepřímá aktivace) přítomnost revmatoidního faktoru

14 Vyšetřovací metody antigen - určuje specificitu metody
detekční systém - určuje citlivost (sensitivitu) metody

15 Aglutinace - princip

16 Aglutinační metody Výhody robustnost nízká cena Nevýhody
nerozliší třídy protilátek nižší citlivost

17 Komplement-fixace - princip

18 Komplement-fixační metoda
Výhody nízká cena Nevýhody nestandardnost nerozliší třídy protilátek pracnost

19 ELISA - princip

20 Reakce se značenou protilátkou
Výhody citlivost rozlišují třídy protilátek automatizovatelnost Nevýhody vyšší cena

21 Blokování účinku antigenu
tato skupina je velmi nesourodá, proto nelze jednoduše shrnout její výhody a nevýhody

22 Průkaz specifických Th1 lymfocytů (QuantiFERON®)
inkubace T-lymfocytů se specifickým antigenem změření hladiny interferonu-γ standardním ELISA testem

23 Praktické provedení indikace
odběr krve do tří zkumavek (spec. ag., pos. kontrola, neg. kontrola) rychlý transport do laboratoře inkubace 24 hod. při 37 °C uchování vlastní provedení testu