Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc

Prezentace na téma: "Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc"— Transkript prezentace:

1 Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc
Bártová M., Vodičková L., Novotná D., Faltýnková A.

2

3 Bioptické zpracování trepanobiopsií
Proč se provádí? U pacientů s chorobami krvetvorby nádorového původu nenádorového původu

4 Odběr materiálu, jeho fixace a odvápnění
Materiál se odebírá z lopatky kosti kyčelní Hned po odběru se materiál vkládá do fixačního roztoku Používáme Lőwyho roztok, který tkáň současně fixuje a odvápňuje

5 Příprava Lőwyho roztoku
Formaldehyd 40% 100ml HgCl g Kyselina octová ledová 50ml Destilovaná voda 850ml Postup přípravy: 20g chloridu rtuťnatého rozpustíme v 60ml vařící destilované vody. Přidáme 100ml 40% formaldehydu, 50ml kyseliny octové ledové a zbývající destilovanou vodu Lőwyho roztok skladujeme při 4°C Roztok je toxický – pozor při manipulaci!

6 Použití Lőwyho roztoku
Materiál se vkládá do tohoto roztoku již při odběru na oddělení Je nutné, aby byl uveden přesný čas vložení tkáně do Lőwyho roztoku Doba fixace a odvápnění se pohybuje mezi hodinami

7 Další zpracování trepanobiopsií
Po hodinách se vzorek tkáně zpracovává stejně jako jiný bioptický materiál V konečné fázi zpracování získáme parafinový blok Následuje krájení řezů silných 2-3m Rutinně u nás zhotovujeme 7 preparátů z každého vzorku a barvíme metodami: Hematoxylin-eosin PAS reakce Perlsova metoda Giemsa Gőmory Unna-Papenheim Naftol-ASD-chloracetátesteráza

8 Barvení hematoxylin-eosin
Základní barvení pro orientaci ve tkáni Výsledek: jádra – tmavě modře cytoplazma – růžově červené Používáme Weigertův železitý hematoxylin

9 HE 100×

10 HE 200×

11 PAS reakce PAS reakcí se dobře zvýrazní megakaryocyty, jejichž cytoplazma se barví červenofialově.

12 PAS 400×

13 Průkaz železitého pigmentu
Perlsovou metodou Umožňuje zhodnocení přítomnosti pigmentu – hemosiderinu – ve stromálních makrofázích a někdy v erytroblastech Výsledek: železo – modře buněčné pozadí – v růžovém tónu

14 Fe 200×

15 Fe 400×

16 Giemsovo barvení Dobře vykresluje buněčné struktury
Identifikuje mastocyty Výsledek: eosinofilní složky – v různých odstínech růžové až červené bazofilní složky – v různých odstínech světle modré, až tmavě modré

17 Giemsa 100×

18 Giemsa 200×

19 Metoda Gőmory – impregnační metoda
Znázorňuje síť retikulárních vláken stromatu a umožňuje tak posoudit kvantitu retikulárních vláken Za některých patologických stavů, například u myeloproliferativních onemocnění, dochází k výraznému zmnožení retikulárních vláken, někdy i kolagenních vláken až do obrazu dřeňové fibrózy = zvazivovatění Výsledek: retikulární vlákna – černě jádra – červeně

20 Gömory 320×

21 Gömory 400×

22 Metoda Unna-Papenheim
Výsledek: cytoplazma plazmocytů – růžově červeně erytroblasty (hnízda erytropoézy) – růžově červeně

23 Elias 640×

24 Průkaz naftol-ASD-chloracetátesterázy
U této metody je důležité barvící roztoky připravovat vždy čerstvé, těsně před použitím Důležité je pH roztoků, pokud neodpovídá požadované hodnotě pH 6.3, musí se upravit Tato metoda je velice citlivá a je nutné dodržovat přesný postup Dobarvení metylzelení Výsledek: bílá krevní řada a mastocyty – červeně ostatní buněčné elementy – zeleně

25 CLAE 40×

26 CLAE 100×

27 CLAE 200×

28 Aplikace imunohistochemických metod
Výsledek imuno metod je po fixaci a odvápnění v Lőwyho roztoku velmi dobrý Využití zejména u lymfoproliferativních chorob Nejčastěji prokazované antigeny: CD20; CD3; CD5; CD23; CD68; CD10; CD138; Bcl-2 Kappa, lambda – lehké řetězce imunoglobulinů, IgA, IgG, IgM MPO-myeloperoxidáza – prokazuje bílou krevní řadu

29 Děkuji za pozornost