Imunogenní smrt nádorových buněk indukovaná HPMA konjugáty.

Prezentace na téma: "Imunogenní smrt nádorových buněk indukovaná HPMA konjugáty."— Transkript prezentace:

1 Imunogenní smrt nádorových buněk indukovaná HPMA konjugáty.
Lubomír Kovář Mikrobiologický ústav AVČR v.v.i. Vídeňská 1083, Praha 4-Krč

2 Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza
33 Apoptóza Imunogenní Neimunogenní

3 Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza
Obeid, Nat Med Apetoh, Nat Med Špíšek, Blood. 2007 56 Apoptóza Imunogenní Neimunogení

4 Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza
Obeid, Nat Med Apetoh, Nat Med Špíšek, Blood. 2007 1 00 Apoptóza Imunogenní Neimunogen

5 Imunogenní vs. neimunogenní apoptóza
1 07 Etoposide Mitomycin C Anthracyclines Obeid et al. 2007

6 Molekulární mechanismy imunogenní apoptózy
1 26 Apoptóza Molekulární mechanismy Zitvogel et al. 2008

7 HPMA konjugáty Dox-HPMAAM Dox-HPMAHYD
2 12 Dox-HPMA HPMA Konjugáty Dox=doxorubicin; HPMA=N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid

8 Protinádorová imunita indukovaná HPMA konjugáty
Retransplantace myší vyléčených konjugátem Dox-HPMAHYD. 2 42 Protinádorová imunita Retransplatace Dox-HPMAHYD (1 x 25 mg Dox. eq./kg) Dox-HPMAHYD (1 x 75 mg Dox. eq./kg) volný doxorubicin (3 x 6 mg/kg) kontrola Říhová et al, Trends Biotechnol :11-7

9 Protinádorová imunita indukovaná HPMA konjugáty
Retransplantace myší vyléčených konjugáty Dox-HPMAAM a Dox-HPMAAM-HuIg. 2 51 Dox-HPMAAM Dox-HPMAAM-HuIg kontrola Říhová et al, Trends Biotechnol :11-7

10 Imunogenní apoptóza – kalretikulin (CRT)
Plazmatická membrána CRT ERp57 CD47 β-actin Buněčný lyzát Kontrola Dox Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Dox-HPMA-HuIgAM 3 25 Imunogenní apoptóza Kalretikulin CRT

11 Imunogenní apoptóza – kalreticulin (CRT)
p-eIF2a; 3h p-eIF2a; 5h eIF2α Kontrola Dox Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Dox-HPMA-HuIgAM 4 37

12 Imunogenní apoptóza – kalreticulin (CRT)
5 00 Přerušovaná čára ukazuje míru exprese kalretikulinu po inkubaci buněk s konjugátem Dox-HPMAAM.

13 Imunogenní apoptóza – heat shock proteins (HSP)
5 19 Imunogenní poptóza Heat shock proteins HSP

14 Imunogenní apoptóza – heat shock proteins (HSP)
5 39

15 Imunogenní apoptóza – HMGB1
Uvolňování High-mobility-group box 1 (HMGB1) proteinu z EL4 buněk. HMGB1, supernatant, 24h HMGB1, supernatant,72h β-aktin, supernatant, 72h HMGB 1, lyzát, 72h Kontrola Dox Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Dox-HPMA-HuIgAM 5 49 Imunogenní apoptóza HMGB1

16 In vitro fagocytóza nádorových buněk
Dox-HPMAAM-HuIg Kontrola Doxorubicin Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Hoechst 33258 24h 24h; aCRT CFSE Gated on CD11c+ dendritic cells 6 15 Fagocytóza In vitro Nádorové buňky

17 In vivo fagocytóza nádorových buněk
CD8α PBS Kontrola Doxorubicin Dox-HPMAHYD Dox-HPMAAM Dox-HPMAAM-HuIg CFSE 7 00 Fagocytóza In vivo Nádorové buňky Gated on CD11c+ dendritic cells

18 In vitro fagocytóza nádorových a nenádorových buněk
7 13 Fagocytóza In vitro Nenádorové buňky

19 In vivo indukce protinádorové odpovědi (Winnův test)
7 34 Winnův test Indukce In vivo

20 Závěr 9 00

21 Závěr · Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1. 9 12

22 Závěr · Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1. · Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs. 9 17

23 Závěr · Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1. · Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs. · Nádorové buňky inkubované s volným, hydrazonově i amidicky vázaným doxorubicinem jsou fagocytovány dendritickými buňky. 9 24

24 Závěr · Volný a hydrazonově vázaný doxorubicin stimulují expresi kalretikulinu a HSPs a uvolnění HMGB1. · Amidicky vázaný doxorubicin stimuluje jen expresi HSPs. · Nádorové buňky inkubované s volným, hydrazonově i amidicky vázaným doxorubicinem jsou fagocytovány dendritickými buňky. · HPMA vázaný doxorubicin je lepší stimulátor protinádorové imunity než volný 9 29

25 Závěr Volný doxorubicin HPMA vázaný doxorubicin 9 33

26 Závěr Volný doxorubicin lepší stimulátor imunogenní apoptózy in vitro
HPMA vázaný doxorubicin 9 39

27 Závěr Volný doxorubicin lepší stimulátor imunogenní apoptózy in vitro
HPMA vázaný doxorubicin lepší induktor protinádorové imunity in vivo 9 48

28 makromolekulární chemie AVČR, v.v.i. Mikrobiologický ústav
Karel Ulbrich Tomáš Etrych Dana Plocová Petr Chytil Jiří Strohalm Michal Pechar Vladimír Šubr Martin Hrubý Martin Studenovský Mikrobiologický ústav AVČR, v.v.i. Blanka Říhová Marek Kovář Ondřej Hovorka Milada Šírová David Větvička Jakub Tomala Martina Kabešová Pavlina Jungrová Helena Mišurcová 10 03