Zlepšování podmínek pro výuku technických oborů a řemesel Švehlovy střední školy polytechnické Prostějov registrační číslo : CZ.1.07/1.1.26/02.0010.

Prezentace na téma: "Zlepšování podmínek pro výuku technických oborů a řemesel Švehlovy střední školy polytechnické Prostějov registrační číslo : CZ.1.07/1.1.26/02.0010."— Transkript prezentace:

1 Zlepšování podmínek pro výuku technických oborů a řemesel Švehlovy střední školy polytechnické Prostějov registrační číslo : CZ.1.07/1.1.26/02.0010

2 Izolace mikroorganismů Autor: Bc. Petr Sedláček

3 Základní pojmy Kultivace = je cílené udržování či rozmnožování mikroorganismů v podmínkách in vitro. Izolace = oddělení jednoho druhu ze směsi mikroorganismů. Kultura = populace mikroorganismů rostoucí na kultivačním médiu.

4 Používané pomůcky Petriho misky s agarem Bakteriologická klička popř. sterilní plastové kličky http://fvl.vfu.cz/sekce_ustavy/mikrobiologie/obrazova_priloha/mikrob/1.html http://www.verkon.cz/sterilizatory-bakteriologickych-klicek-plamenne / http://fvl.vfu.cz/sekce_ustavy/mikrobiologie/obrazova_priloha/mikrob/3.html

5 Používané pomůcky Kahany http://www.verkon.cz/kahany/ http://www.unimed.cz/kahany-laboratorni Kultura bakterií http://www.chempoint.cz/turkova

6 Křížový roztěr Princip metody spočívá v postupném vyřeďování původní husté kultury tak, aby na konci vyrůstaly na tuhém médiu jednotlivé kolonie mikroorganismů. Po agaru roztíráme stále menší a menší množství mikroorganismů. V místě tzv. hádku již vyrůstají jednotlivé kolonie, u kterých lze hodnotit např. charakteristický profil, tvar, barvu, okraje apod. Kolonie je potomstvo jedné původní buňky. Tato metoda se používá v případě směsných kultur s cílem získat čisté kultury.

7 Hodnocení kolonií MO / 1. Velikost – kolonie mohou být tečkovité nebo se jejich velikost vyjadřuje průměrem v mm. 2. Tvar – kolonie pravidelně okrouhlá, nepravidelná … 3. Okraje – rovné, zvlněné, výběžkaté, kořenovité 4. Profil - plochý, mírně vypouklý, vypouklý, výrazně vypouklý, pupkovitý, vyvýšené okraje… 5. Povrch – lesklý, hladký, matný, drsný, zvrásnělý.. 6. Transparence – průhledná, průsvitná, neprůsvitná 7. Barva – bezbarvé, šedobílé, barva daná tvorbou pigmentu nebo změnou barevného indikátoru v živné půdě. 8. Změny okolí – posuzujeme změnu barvy (produkce ve vodě rozpustných pigmentů, změna pH média. 9. Konzistence – mazlavá, máslovitá, drobivá, vosková, hlenovitá 10. Zápach – značně subjektivní znak (fekální, hnilobný, kyselý, nasládlý…)

8 Hodnocení kolonií MO http://fvl.vfu.cz/sekce_ustavy/mikrobiologie/mikrobiologie_pro_farmaceuty/praktikum03/

9 Postup http://rustreg.upol.cz/vyuka/microbiology/04_Dynamika_bakterialniho_rustu.pdf Vyžíháme bakteriologickou kličku v plameni kahanu. Ze suspenze mikrobů ve fyziologickém roztoku nebo přímo z vyrostlé kolonie na agaru odebereme bakteriologickou kličkou část populace. http://rustreg.upol.cz/vyuka/microbiology/04_Dynamika_bakterialniho_rustu.pdf

10 Postup Kličkou provedeme oválný nátěr = inokulum. Kličku vyžíháme a přes hustý nátěr provedeme 3 čáry. Znovu kličku vyžíháme a provedeme tři čáry kličkou přes čáry původní (nejprve přes všechny tři předešlé čáry, podruhé jen přes dvě a naposledy přes jednu). Předchozí krok zopakujeme a bez výměny kličky uděláme na zbývající ploše misky přes nové čáry kličkou hádka. Zavřeme Petriho misku a necháme ji inkubovat v inkubátoru v poloze dnem vzhůru.

11 Schéma křížového roztěru Schéma křížového roztěru kultury na Petriho misku s agarem. Každá barva značí použití nové (nebo vyžíhané) kličky. vlastní zpracování

12 Výsledek Je-li křížový roztěr správně proveden, narostou mikroorganismy po příslušné kultivaci v koncových částech křížového roztěru ve formě dobře oddělených kolonií. http://luciez.blog.cz/0810/dulezita-bakterie-oenococcus-oeni

13 Způsob očkování kultury na Petriho misku Cílem je získání většího množství kultury pro další práce; příklad očkování 2 různých kmenů na jednu misku; při očkování jednoho kmene se hádek “nakreslí” přes celou plochu misky. https://www.google.cz/#q=O%C4%8Dkov%C3%A1n%C3%AD+kultury+kvasinek

14 Postup Vyžíháme bakteriologickou kličku. Otevřeme zkumavku s kulturou, ožehneme hrdlo, nabereme malé množství kultury na kličku, ožehneme hrdlo zkumavky nad plamenem a zátku a uzavřeme zkumavku. Otevřeme Petriho misku a několika jemnými tahy rozetřeme kulturu po agaru. Zavřeme Petriho misku a necháme ji inkubovat v inkubátoru v poloze dnem vzhůru.

15 Zdroje uiozp.ft.utb.cz/studmat/2008912142943/Úloha1.doc https://dspace.vutbr.cz/bitstream/handle/11012/9593/ DP%20Vl%C4%8Dkov%C3%A1.pdf?sequence=1 https://dspace.vutbr.cz/bitstream/handle/11012/9593/ DP%20Vl%C4%8Dkov%C3%A1.pdf?sequence=1 Veselá, M., Drdák, M.: Praktikum z obecné mikrobiologie, 1999, VUT Brno

16 Děkuji za pozornost !