Možnosti regenerace in vitro – zdroje explantátů Gamety (androgeneze, gynogeneze) Embrya (embryokultury x embryogeneze) Semena (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu) Embryogeneze na zygotických embryích Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny) Meristémy (apikální, axilární) Diferencované orgány dospělých rostlin (listy, kořeny, lodyhy – nody)

postup regenerace in vitro orgánové kultury Společné pro in vitro kultury 1/ izolace explantátu (primární kultura) 2/ proliferace, multiplikace (pasážování) 3/ rhizogeneze 4/ aklimace

EXPLANTÁTY Z KLÍČNÍ ROSTLINY epikotyl děloha hypokotyl Kmín (Krens,2003)

Organogeneze přímá nepřímá KALUS

Kalus - dediferencované pletivo ránový obrana organismu neorganogenní (neembryogenní) produkce metabolitů, studium organogenní (prýtykořeny) selekce, mikropropagace embryogenní (somatické embryo SE rostlinka) selekce, mikropropagace (nebezpečí vzniku chimér)

Kalus regenerovaný na hypokotylu hrachu

Přímá organogeneze - (nižší riziko mutací) : rychlé namnožení nových odrůd (podstatné zvýšení množitelského koeficientu, urychlení šlechtitelského procesu) (brambory klasicky 1: 5 -10, mikropropagace 1: 500000) vzdálená křížení šlechtitelsky cenné mutace množení těžko množitelných kultur (rododendrony apod.), cenných jedinců, vzácných druhů

Přímá organogeneze Adventivní meristémy diferenciují na listech, lodyhách nebo částech květu

Kmín (Krens,2003)

Nepřímá organogeneze - využití: selekce využití přirozené somaklonální variability selekční tlak mutageneze (transgenoze)

Organogeneze Ch. rubrum (Flores, 2004)

Nepřímá organogeneze na segmentech hypokotylu cukrové řepy (Jacq et al, 1992) 1/ indukce kalusu (a,c, d) 2/ regenerace prýtů (e) AUX:CK 3) zakořenění (f) bez RR nebo s IBA 4) aklimace (g)

Jak můžeme ovlivnit způsob regenerace

somatická embryogeneze CK: AUX v indukci procesů diferenciace a dediferenciace koncentrace cytokininu auxinu tvorba kořenů na řízcích tvorba buněčné suspenze somatická embryogeneze iniciace tvorby kalusu indukce adventivních pupenů proliferace prýtů

Způsoby hodnocení a dokumentace kultur

Počet kontaminovaných/ rostoucích/nerostoucích kultur (1. Týden) * V určitém časovém odstupu (pasáž) Počet kontaminovaných/ rostoucích/nerostoucích kultur (1. Týden) Měření přírůstku prýtů, kořenů, kalusu (*) vážení - nárůst hmotnosti (*) počítání regenerovaných prýtů (koeficient množení), buněk (*) hodnocení životnosti (*) mitotický index (*)

A to je pro dnešek konec teorie Máte k tomu nějaké dotazy?