Novinky v mikrobiologii vody 2012 Dana Baudišová Novinky v mikrobiologii vody 2012

Koliformní bakterie a E. coli Koliformní bakterie postupně mizí z právních předpisů týkajících se jakékoliv povrchové vody (pouze pitné) Fekální (termotolerantní) koliformní bakterie jsou doposud používány, svým způsobem je to česká specialita, ČSN 757835 výborně funguje, je hodně selektivní, ale málo citlivá E. coli je hlavní indikátor fekálního znečištění – ale v současné době je používána řada nesrovnatelných metod ČSN 75 7835 mFC, 44°C, GLR není mezinárodní ČSN EN ISO 9308-1 Tergitol, 36°C, IND nebo GLR (dnes i Rapid 2 E. coli agar a další, např. Biokar) Boj mezi firmami ČSN 9308-2 Colilert, GLR, 36°C, tekuté (v návrhu) ČSN 9308-3 Mikrotitrační destičky , GLR 44°C, tekuté

E. coli různými metodami E. coli cfu/ 100 ml ČSN 75 7835 88 ČSN EN ISO 9308 -1 IND 380 Colilert 18 / Quanti-Tray 858 CCM agar (Merck) 100 (malá čísla) Rapid 2 E. coli agar 50 (malá čísla)

Problémy enterokoků Poměrně citlivé stanovení na kvalitu média Firma Biorad přestala dodávat SB s TTC uvnitř Enterolert nedosahuje výsledků jako Colilert (a je více typů o různé formuli) Firmy dodávající hotové půdy (na miskách) ne vždy uvádějí původ ingrediencí.

Výsledky z OR-MB-1/12

Clostridium perfringens Připravuje se nová norma, použití TSC média s konfirmací na kyselou fosfatázu Drahé (zejména činidlo na kyselou fosfatázu), je nutné ověřovat všechny vyrostlé kolonie, médium je nestálé (pak kolonie dostatečně nečernají) Validace organizována z Vídně, výsledky zatím neznáme

Želatinové disky s definovaným obsahem Dodává Česká sbírka mikroorganismů Kontrolní kmeny ve formě želatinových disků s definovanou hodnotou cfu (1 lahvička, 10 disků, expirace 1 rok) . Pro vodu E. faecalis, E. coli. S. aureus). V nabídce od začátku roku 2011, cena 990 Kč bez DPH

Naše zkušenosti Nutno skladovat při -20°C ( je to jiné než u ostatních CCM, je to tam uvedeno) E. coli je méně stabilní než E. faecalis Dobrá manipulace s disky Lépe ponechat kultivaci 48 hodin než 24 hodin (nárůst na mFC a SB, dobarvení na Endo)

E. coli ktj/disk

E.faecalis (ktj/disk po 48 hodinách)

Nejistoty Byla vydána nová norma ISO 29201 pro hodnocení nejistoty mikrobiologických analýz (jakost vod) – bude se zřejmě překládat do češtiny jako ČSN. Letos??? Zahrnuje oba dva možné přístupy, a to jak metodu „černé skříňky“ tak metodu „per partes“ Potravinářská norma ISO/TS 19036 se pro vodu nehodí (viz loňský seminář)

Můj aktuální názor Nejistoty se musí stanovit, nikoliv nutně vypočítat, vše je však nutné mít podložené a vysvětlené Laboratoř má mít a používat postup pro odhadování nejistoty měření. V rámci tohoto odhadu má laboratoř identifikovat všechny složky nejistoty. Zdroje přispívající do celkové nejistoty mohou zahrnovat použité materiály, metody a zařízení použitá na vzorkování a zkoušení, okolní prostředí, personál, a podobně. Jedná se o tvůrčí činnost, která pomůže pochopit hlouběji metody a jejich výsledky. Je dále si nutné uvědomit, že je i vlastní rozptyl partikulí ve vzorcích, což je zahrnuto v konfidenčních mezích dle ČSN EN ISO 8199). Kvalifikovaným odhadem, podporovaným výsledky stanovení opakovatelnosti a reprodukovatelnosti v počítání, lze za odpovídající nejistoty považovat 30 % (pro stanovení skupin s reprodukovatelností v počítání do 10 % - fekální koliformní bakterie, enterokoky, C. perfringens, kultivovatelné mikroorganismy) až 40 % (koliformní bakterie a E. coli). Tyto hodnoty nejistot 30-40 % jsou i v souladu s konfidenčními mezemi. Toto platí pro kvantitativní stanovení (tj přes 10 ktj).

A zpět k OR-MB-1/12 rozptyl výsledků Průměr Všichni (n) VÚV (5 vzorků) Kult 36 5,4 57 % (30) 34 % Kult 22 42,5 112 % (30, z toho 2 hodně odlehlé) 38 % KOLI ČSN 6,3 74 % (12) 23 % KOLI ČSN EN ISO 3,8 63 % (27) 32 % ECOLI ČSN 5 50 % (15) 29 % ECOLI ČSN EN ISO 1,6 43 % (25) 63 % FKOLI 8,4 45 % (19) 28 % ENT 4 41 % (30) CLOSTR 13 32 % (15) 35 %

Závěrečné poznámky Nikdy nebude univerzální postup vhodný pro všechno a pro všechny Nikdo to za vás nemůže udělat Dnes je to při všech povinných předpisech v podstatě jediná tvůrčí činnost v provozních laboratořích  Nejde o velkou statistiku, je nutné to promyslet a 95 % výsledků duplicitních stanovení se musí do stanovených nejistot vejít.

Praktické školení v metodách mikrobiologie vody Bude vypsáno s největší pravděpodobností na konec ledna 2013, pokud budou zájemci 2* půldenní odpoledne+ dopoledne, max 6 frekventantů na kurz, možnost noclehu ve VÚV T.G.M., v.v.i. Účastníci MPZ organizovanými ASLAB v letošním roce budou mít významné slevy.

Prezentace bude do konce června k dispozici ke stažení www.vuv.cz HEIS Databáze Projekty   Metody mikrobiologického rozboru vod, jejich unifikace a uplatnění v hydroanalytických laboratořích Plánované akce, pořádané oddělením mikrobiologie vody Na této adrese jsou stále prezentace i z let minulých

Novinky v mikrobiologii vody 2012 Dana Baudišová Novinky v mikrobiologii vody 2012 Výzkumný ústav vodohospodářský T. G. Masaryka, v.v.i. | Podbabská 30/ 2582, 160 00 Praha 6 | +420 220 197 111 info@vuv.cz, www.vuv.cz, Pobočka Brno | Mojmírovo náměstí 16, 612 00 Brno-Královo Pole | +420 541 126 311 info_brno@vuv.cz, Pobočka Ostrava | Macharova 5, 702 00 Ostrava | +420 596 134 181 | info_ostrava@vuv.cz