Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce

Prezentace na téma: "Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce"— Transkript prezentace:

1 Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce
Jan Hrach, Veronika Mašková

2 Osnova Teoretický úvod Vlastní práce Závěr Proteiny Krystalizace
Difrakce Vlastní práce Závěr

3 Proteiny složené z aminokyselin základ živých organismů funkce zásobní
katalytická (enzymy) regulační (hormony) obranná transportní (hemoglobin) stavební 1967 vyřešena první struktura enzymu lysozym

4 Krystalizace difuzní metody metoda visící kapky metoda sedící kapky
v krystalizační kapce je menší koncentrace roztoku než v rezervoáru  difúze par z kapky do rezervoáru  růst koncentrace roztoku v kapce A – krycí víčko B – krystalizační kapka C – rezervoár D – matečný roztok

5  Růst krystalu

6  potvrzení krystalu proteinu
metody destruktivní absorpce barviva dehydratace drcení nedestruktivní polarizace fluorescence pod UV zářením rentgenová difrakce

7 Difrakce Difraktometr na FZÚ AV v Cukrovarnické ulici w k j

8 Vlastní práce Cíle krystalizace proteinu sběr difrakčních dat
řešení struktury proteinu

9 1. Krystalizace lysozym c = 120 mg/ml NaCl c = 1M
octan sodný c = 0,1M polzethylen glykol 30%

10 Fázový diagram

11 protein 120 mg/ml 90 mg/ml 60 mg/ml 30 mg/ml 10 mg/ml 0,1M 0,2M 0,5M 1M 2M 3,6M NaCl

12 Potvrzení krystalu proteinu

13 Lovení a mražení krystalů
velikost smyčky: 400 μm

14 2. Difrakce

15 Difrakční snímek více krystalů

16 3. Vyřešená struktura proteinu

17 Závěr Vypěstovali jsme krystaly proteinu a ověřili fázový diagram.
Nasbírali jsme soubor difrakčních dat Vyřešili jsme strukturu lysozymu

18 Poděkování Ing. Monika Kučeráková (FÚ AV ČR) Ing. Jan Stránský (ÚMCH)
Leona Švecová (KIPL FJFI) organizátoři Týdne vědy

19 Děkujeme za pozornost!