Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Metody imunodifuze a precipitace v gelech Jana Novotná.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Metody imunodifuze a precipitace v gelech Jana Novotná."— Transkript prezentace:

1 Metody imunodifuze a precipitace v gelech Jana Novotná

2 Imunoprecipitační reakce v gelech Dvojitá difúze ve dvou směrech

3 Antigeny, jejich vlastnosti a složení Imunogenicita - imunitní odpověď specificky namířená proti antigenu. Antigenní specifita – schopnost molekuly antigenu (nebo její části) reagovat se specifickou protilátkou. Antigenicita – dána povrchovou strukturou imunogenu – antigenními determinantami ( ovalbumin, MH , má 5 antigenních determinant a thyroglobulin, MH , více než 40 ). Organismus reaguje jen na ty, které jsou mu cizí. Haptény – antigenní determinanty, samy o sobě neschopné vyvolat imunitní odpověď. Stanou se imunogenní navázané na bílkovinný nosič.

4 Antigeny, jejich vlastnosti a složení Chemické složení antigenů:  bílkoviny  polysacharidy  lipopolysacharidy  nukleoproteiny  glykoproteiny  steroidní hormony  bakteriální a živočišné buňky, viry  syntetické polypeptidy  syntetické polymery

5 Protilátky (imunoglobuliny) a jejich složení Bílkoviny se specifickou vazebnou aktivitou vůči antigenu (antigenní determinantě), na jejichž podnět se vytvořily. Chemická povaha - imunoglobuliny

6 Protilátky (imunoglobuliny) a jejich složení Počet různých specifických protilátek - > Imunoglobuliny - ~ 20% plasmatických bílkovin. Vazebné místo – 5% molekuly protilátky, rozlišuje velmi jemné rozdíly v antigenních determinantách. Struktura vazebného místa je přesně komplementární k antigenní determinantě (zámek a klíč), asi 3 aminokyselinové zbytky.

7 Protilátky (imunoglobuliny) a jejich složení Variabilita protilátek podmíněna 5ti třídami Ig: G, A, M, D, E Těžké řetězce –  Lehké řetězce –  Jejich podtřídami řetězců:  IgG –          IgA –      IgM -    

8 Podstata vazeb antigen protilátka Síly elektrostatické - opačně nabité skupiny (-NH 3+ ) – lysin, (-COO - ) – k. asparagová) Vodíkové vazby (slabé reversibilní vodíkové můstky) Hydrofobní interakce (postranní řetězce nepolárních aminokyselin – Val, Leu, Ile, Phe) Van der Waalsovy síly (elektrony vnějších orbitů dvou makromolekul)

9 Afinita protilátky k 2 Pl + Ag  PlAg k 1 K = = [PlAg] [Pl] [Ag] k1k1 k2k2 Rovnovážná konstanta

10 Imunoprecipitační reakce Slouží ke kvalitativní a kvantitativní detekci antigenů a protilátek: Fáze první – vznik primárních komplexů o nižší M.H. Fáze druhá – vzájemné propojení Ag a Pl do trojrozměrné mřížkovité struktury (vznik nerozpustných agregátů)

11 Poměr antigen/protilátka Prozóna : nadbytek Pl, nevytváří se precipitát (rozpustné imunokomplexy) Zóna ekvivalence- optimální poměr Ag/Pl - precipitát Post-zóna - nadbytek Ag (imunokomplexy se rozpadají)

12 Imunoprecipitační reakce v gelech Zakládají se na různé rychlosti difúze Ag a PL do gelu v závislosti na: jejich koncentraci fyzikálně chemických vlastnostech struktuře a vlastnostech gelu Nejužívanější gely – agar a agaróza

13 Imunoprecipitační reakce v gelech Jednoduchá difúze v jednom směru - difúze antigenu do gelu s protilátkou - difúze protilátky do gelu s antigenem

14 Imunoprecipitační reakce v gelech Dvojitá difúze ve dvou směrech (metoda Ouchterlonyho)

15 Imunoprecipitační reakce v gelech Dvojitá difúze ve dvou směrech

16 Imunoprecipitační reakce v gelech Kvantifikace: antigenuprotilátky

17 Imunoprecipitační reakce v gelech Jednoduchá radiální difúze

18 Imunoprecipitační reakce v gelech Imunoelektroforéza – kombinuje separaci bílkovin ve směsi pomocí elektroforézy v agarovém gelu na jednotlivé frakce s imunodifúzí a precipitací. Plasma (směs antigenů) Elektroforéza Antisérum (směs protilátek) Imunodifúze

19 Imunoprecipitační reakce v gelech

20 Raketková imunoelektroforéza: Antigen pomocí elektroforézy migruje do gelu, který obsahuje protilátku. Výška raketky odpovídá koncentraci antigenu.


Stáhnout ppt "Metody imunodifuze a precipitace v gelech Jana Novotná."

Podobné prezentace


Reklamy Google