Restrikční mapování.

Prezentace na téma: "Restrikční mapování."— Transkript prezentace:

1 Restrikční mapování

2 Účel restrikčního mapování
zjistit rozložení restrikčních míst ve fragmentu DNA za pomoci restrikčních endonukleáz BglII EcoRI BglII EcoRI BamHI HindIII BamHI EcoRI BamHI EcoRI EcoRI HindIII BamHI EcoRI EcoRI

3

4

5

6 Dva základní přístupy štěpení dvojicemi restriktáz
parciální štěpení jednotlivými enzymy

7 Štěpení dvojicemi enzymů 1
koncové značení rozštěpení a izolace jednoho z řetězců štěpení EcoRI štěpení BamHI

8 Štěpení dvojicemi enzymů 2
+ + + _ _ _

9 Štěpení dvojicemi enzymů 3
A G C H E J D F B I štěpení BamHI štěpení EcoRI 1 1 2 A G 2 3 3 4 C H 4 5 5 6 E J 6 7 8 7 F D 9 8 9 B I

10 Štěpení dvojicemi enzymů 4
+ + + _ _ _

11 Štěpení dvojicemi enzymů 5
1 …..A,G 2 …..G,C A C E D B 3 …..C,H 1 2 3 4 5 6 7 8 9 4 …..H,E 5 …..E,J 6 …..J,D G H J F I 7 …..D,F 8 …..D,I 9 …..I,B

12 Mapování pomocí parciální digesce 1
koncové značení rozštěpení a izolace jednoho z řetězců parciální digesce elektroforéza a autoradiografie

13 Mapování pomocí parciální digesce 2
+ + + _ _ _ elektroforetogram autoradiogram

14 Využití metody „sekvenování chudých“ kvalitní znaková data
v případě vhodně dlouhých fragmentů velmi efektivní metoda umožňuje odhadnout polaritu evolučních změn pro velký počet vzorků ideální v kombinaci se sekvenováním