Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

DNA izolace Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "DNA izolace Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová."— Transkript prezentace:

1 DNA izolace Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová

2 DNA izolace Základní kroky Lýze buněk Odstranění proteinů - proteáza - adsorpce nebo extrakce Precipitace DNA etanolem Rozpuštění DNA ve vodě či v pufru

3 DNA izolace Tři základní metody 1.Extrakce fenol-chloroform (rozdílná rozpustnost v roztocích) 2.Vysolovací metoda (precipitace proteinů pomocí NaCl) 3.Adsorpční metoda (silikagelová membrána)

4 Čistota a koncentrace DNA Spektrofotometrie Absorbční maximum pro nukleové kyseliny 260 nm pro proteiny 280 nm Koncentrace DNA – při 260 nm Čistota DNA: poměr 260/280 nm

5 Čistota a koncentrace DNA Fluorescentní barvy DNA s navázanými barvami se v gelu zviditelní (etidium bromid) Gel obsahuje DNA standardu (jejíž koncentrace je předem stanovena) Porovnání dvou světelných intensit – standardy a našeho vzorku

6

7 Gelová elektroforéza Separační metoda Gel – síťovitá struktura polymerních molekul s póry Gel- agaróza - polyakrylamid Etidium bromid je barva vázající se do DNA Vytváří komplex excitující fotony po expozici UV

8 Gelová elektroforéza Separační metoda PRINCIP: pohyb nabitých molekul v elektrickém poli pohyb ve směru od – k + (nukleové kyseliny obsahují negativně nabité fosfátové skupiny) Rychlost pohybu DNA závisí na délce DNA fragmentu nepřímo úměrně Délka neznámých fragmentů se porovnává s délkou standardních fragmentů


Stáhnout ppt "DNA izolace Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová."

Podobné prezentace


Reklamy Google