DNA-Fingerprint1 Testování produktů elektroforézou v agarózovém gelu.

Prezentace na téma: "DNA-Fingerprint1 Testování produktů elektroforézou v agarózovém gelu."— Transkript prezentace:

1 DNA-Fingerprint1 Testování produktů elektroforézou v agarózovém gelu

2 DNA-Fingerprint2 1. Příprava elektroforézní komory

3 DNA-Fingerprint3 1. Příprava gelové vaničky 1.1 Přidejte 1 g agarózy k 33 ml TAE- pufru do 100 ml Erlenmayerovy baňky 1.2 Svařte směs v mikrovlnce, potom protřepejte a znovu krátce povařte 1.3Nechte agarózový roztok zchladnout, než dosáhne 55 °C (otestujte teplotu na hřbetu dlaně) a přelijte gel

4 DNA-Fingerprint4

5 5 1.4Poté, co gel ztuhne, odstraňte kovové plíšky z gelové vaničky 1.5Přilijte 270 ml TAE-pufru, abyste pokryli celý gel 1.6Vyjměte hřebínek 1. Příprava elektroforézní komory

6 DNA-Fingerprint6 2. Příprava vzorků pro gelovou elektroforézu

7 DNA-Fingerprint7 2. Příprava vzorků pro gelovou elektroforézu 2.1Vyndejete 6 PCR zkumavek z termocykleru 2.2Vložte zkumavky do držáků

8 DNA-Fingerprint8

9 9 2.3Do každé ze zkumavek z PCR napipetujte10 µl Orange G nanášecího barviva (LD) a promíchejte jemným potřepáváním 2. Příprava vzorků pro gelovou elektroforézu

10 DNA-Fingerprint10 3. Naplnění gelových jamek

11 DNA-Fingerprint11 3. Naplnění gelových jamek 3.1Naneste do gelových jamek zleva doprava: - 20 µl molecular weight ruler (MWR) - 20 µl –GMO control s PMM (1) - 20 µl –GMO control s GMM (2) - 20 µl vzorku jídla (T) s PMM (3) - 20 µl vzorku jídla (T) s GMM (4) - 20 µl +GMO-DNA s PMM (5) - 20 µl +GMO-DNA s GMM (6)

12 DNA-Fingerprint12 4. Průběh elektroforézy

13 DNA-Fingerprint13

14 DNA-Fingerprint14 4. Průběh elektroforézy 4.1 Zavřete elektroforézní komoru a spusťte elektroforézu při 120 V 4.2 Elektroforézu zastavte, když se barevná linie přesune 1 cm před konec gelové vrstvy

15 DNA-Fingerprint15 5. Zviditelňování fragmentů DNA

16 DNA-Fingerprint16 5. Zviditelňování DNA fragmentů 5.1 Otevřete elektroforézní komoru a vytáhněte vaničku s gelem! Pozor, gel je velmi kluzký (slijte pufr, dá se opakovaně použít) 5.2 Přeneste gel na barvící podložku, přidejte 70 ml barvicího roztoku (50x) a dvě minuty jemně protřepávejte

17 DNA-Fingerprint17 5.3Po dvou minutách slijte barvící roztok a gel odbarvěte jemným protřepáváním v teplé kohoutkové vodě (40 - 50 °C) po dobu dvaceti minut. Uschovejte barvivo pro opakované použití! 5. Zviditelňování DNA zlomků

18 DNA-Fingerprint18 6. Vyhodnocení

19 DNA-Fingerprint19 6. Vyhodnocení 6.1S pomocí měřítka molekulových hmotností (MWR) s následujícími délkami100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp a 1000 bp identifikujte proužky DNA v gelu

20 DNA-Fingerprint20 6.2Je vaše testované jídlo geneticky modifikováno? Připravte si krátké slovní hodnocení vašich výsledků! 6. Vyhodnocení