Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Založení laboratoře v roce: 1998, definitivní podoba od roku 1999 Flow-cytometr Partec, model PA Ve ŠS se využívá pro určení relativního obsahu 2C DNA.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Založení laboratoře v roce: 1998, definitivní podoba od roku 1999 Flow-cytometr Partec, model PA Ve ŠS se využívá pro určení relativního obsahu 2C DNA."— Transkript prezentace:

1 Založení laboratoře v roce: 1998, definitivní podoba od roku 1999 Flow-cytometr Partec, model PA Ve ŠS se využívá pro určení relativního obsahu 2C DNA a k určení počtu chromozómů a stanovení stupně ploidie nebo určení typu apomixie hlavně u :  mezidruhových a mezirodových hybridů jílků a kostřav (Festulolium)  jetele lučního a jeho hybridů  jílku vytrvalého, mnohokvětého a jednoletého  kostřavy luční a rákosovité, kostřavy červené a ovčí  lipnice luční, roční a obecné  psinečku výběžkatého, tenkého a dalších druhů (ovsíku, srhy) Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Laboratoř flow-cytometrie ŠS Hladké Životice

2 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Za poslední 4 roky bylo změřeno kolem 40 tis. vzorků, za loňský rok bylo změřeno 14 tis. Vzorků, je-li cytometr provozuschopný, dvě laborantky pracují neustále. Formou služeb laboratoř určovala relat. obsah DNA a počet chromozomů nebo úroveň ploidie u dalších druhů a plodin  salát (Lactuca sp.) Kat. botaniky UP Olomouc  trávy a jetele, žito, svazenku a další pícniny pro ÚKZUS Svitavy a ÚKZUP Sp. Vlachy, Osevu PRO Zubří, Agrogen Brno, Uni ŠS Větrov, Targo Červený dvůr a další firmy  astry a jejich polyploidy pro MZLU Lednice  řepky - kalusy a rostliny z prašníkových kultur VÚRV Ruzyně a Agritec Šumperk  sóju a hrách pro Agritec  různé druhy rostlin z And (Oxalis, ) pro ITZ ČZU Praha  léčivky, orchideje, bonzaje a další druhy

3 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Laboratoř flow-cytometrie ŠS Hladké Životice

4 Protokol : Vzorek asi 25 mg listového nebo jiného pletiva se jemně naseká žiletkou v 180ml roztoku extrakčního pufru OTTO I, určeného k izolaci jader, získaná suspenze je doplněna 800ml roztoku OTTO II, obsahující DAPI. Vzorek se filtruje přes nylonový filtr 40  m a po krátkém odstání se vzorek měří na cytometru. Pro jednotlivé druhy se používají jejich standarty - vybrané genotypy se známým relativním i absolutním obsahem DNA (DAPI, PI), které se udržují vegetativně klonováním. Na tyto standarty se pak měření vztahuje a počítá rel. obsah DNA nebo počet chromozomů. Při měření se používá nejčastěji směsný vzorek - vlastní vzorek a standarta současně. Pro některé účely se používá směs více vzorků dohromady (různé ploidie) nebo „ bulků“, kdy vzorek tvoří směs jedinců (u odrůd). Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice;

5 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Měření obsahu DNA v Olomouci UEB, PAS - PI Naše kontrolaObsah DNA (pg) Jetel luční 4n1,8701 Smělek5,0198 Jílek vytrvalý 2n5,4296 Ovsík žlutavý Rožnovský5,5323 Kostřava luční6,4088 Psineček tenký Golf6,8995 Psárka luční13,1389 Kostřava červená Ferota14,1130 Kostřava rákosová Kora16,9005 jako standard byl použit hrách - 9,09 pg DNA Lipnice luční Slezanka 8,6455 pro Slezanku bylo použito jako standard žito - 16,19 pg DNA

6 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; JV 14 chrom. HannibalFL 42 chrom. Hykor LL Slezanka 60 chrom KČ 42 chrom. Ferota

7 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Obsah DNA u jílků, kostřav a jejich hybridů měřených na PI a DAPI

8 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; jílek mnohokvětý 2n=4x =28, změřený na jílek vytrvalý 2n=2x= = / x 14 počet chrom. = ( hodnota píku vzorku / hodnota píku standardu ) x počet chrom standartu Příklad výpočtu počtu chromozómů:

9 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Směsný vzorek Festulolium, 7 genotypů s různým obsahem DNA

10 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Závislost (linearita) rel. obsahu DNA a ploidie u jílků ( Lm, Lp), kostřav (Fp, Fa) a jejich hybridů

11 Šlechtitelská Stanice Hladké Životice s.r.o. Fulnecká 95, Hladké Životice; Referenční genotypy některých trav a jetelů pro flow-cytometrii


Stáhnout ppt "Založení laboratoře v roce: 1998, definitivní podoba od roku 1999 Flow-cytometr Partec, model PA Ve ŠS se využívá pro určení relativního obsahu 2C DNA."

Podobné prezentace


Reklamy Google