Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

DĚLICÍ METODY I. – úvod Význam DM– výskyt studovaných látek ve směsích Podmínka studia: Získat čistou látku Ověřit její čistotu.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "DĚLICÍ METODY I. – úvod Význam DM– výskyt studovaných látek ve směsích Podmínka studia: Získat čistou látku Ověřit její čistotu."— Transkript prezentace:

1 DĚLICÍ METODY I. – úvod Význam DM– výskyt studovaných látek ve směsích Podmínka studia: Získat čistou látku Ověřit její čistotu

2 Historie DM Alchymisté: destilace, srážení, extrakce, krystalizace 20.století: LSC - chemie přírodních látek PC, IEC – chemie bílkovin AC – jednostupňová operace → antigeny Empirie → racionální přístup

3 Klasifikace DM Podle vlastností b.v.- destilace, lyofilizace Rozpustnost – krystalizace, srážení, extrakce K D – extrakce, LLC,GLC K HA, K BOH – IEC μ – Elfo V – centrifugace, GPC, dialýza, UF Podle fází V jedné fázi – Elfo, dialýza Mezi dvěma fázemi – chromatografie, krystalizace, destilace Podmínka dělení: rozdíl aspoň v jedné fyzikální či chemické vlastnosti

4 Volba DM Šetrnost x účinnost x ekonomika Dělení není ani teoreticky 100% ← K Hodnocení dělení: Stupeň čistoty Výtěžek [%] IZOLACE (vydělení)SEPARACE (oddělení) Organická chemie individuum Biochemie skupina látek DĚLICÍ METODY

5 Typicky vícestupňový postup čištění proteinu StupeňCelkový protein ObjemCelková aktivita Specifická aktivita VýtěžekStupeň vyčištění mgmlUU/mg% 1. Hrubý extrakt , Precipitace síranem amonným , Chromatografie na DEAE-celulose , Chromatografie na hydroxyapatitu , Gelová filtrace na Sephadexu G ,

6 1. NALEZENÍ ZDROJE Ekonomické hledisko: Co nejlevnější zdroj Co největší obsah

7 2. UVOLNĚNÍ Z TKÁNĚ desintegrace, destrukce 1.MECHANICKY – mlýny, kuchyňský masový mlýnek 2.HOMOGENIZACE – s pufrem, mixer 3.LYSE BUNĚK OSMOTICKÝM TLAKEM 4.CHEMICKY – louh, enzymy: lysozym, celulasa, 5.RŮZNÉ – ultrazvuk „acetonový prášek“ Homogenizátor Pottera a Elvehjema

8 Metody desintegrace buněk

9 3. EXTRAKCE l, s  l (  ) Teorie extrakce → výpočet výtěžku → LC – mnohonásobná kontinuální extrakce Volba rozpouštědla: Maximální c A SIMILIA SIMILIBUS SOLVENTUR l  l Minimální vzájemná rozpustnost kapalin – eluotropická řada ε r, maximální Δε r Maximální D Maximální Δρ (ne emulze), minimální η, inertnost

10 3.1. EXTRAKCE Z KAPALINY Rozdělovací konstanta Rozdělovací koeficient K D = (a A ) org. /(a A ) H2O D = (c A ) org. /(c A ) H2O E (výtěžek %) ≈ D, V org. /V H2O, n

11 3.1.1 METODY Vytřepávání – dělička (3x) Roztřepávání, protiproudé rozdělování

12

13

14 Protiproudé rozdělování - Craigování Průmyslové použití Rychlé, Bezodpadové Malá spotřeba rozpouštědel Matematické zpracování ↓ optimalizace procesu antibiotika, cholesterol z lanolinu

15 Izolace surového methyloxytocinu (SPOFA) Přístroj: QUICKFIT & QUARTZ 100 jednotek 0,05% AcOH v sec.BuOH

16 3.2. EXTRAKCE Z PEVNÉ LÁTKY Soxhletův extraktor za horka kontinuální

17 Moderní Soxhlet SOXTEC Tecator – nepřímé vyhřívání cirkulujícím olejem ROVNOVÁŽNÝ EXTRAKTOR Tecator – mechanicky pro tepelně a světelně citlivé látky SOXWAVE Prolabo Fokusovaná mikrovlnná technologie Automatické Úspora času,rozpouštědel, nákladů Šetrné SOXTEC

18

19 4. SRÁŽENÍ   s  c VYSOLOVÁNÍ Rozpustnost cystinu x vsolování vysolování IEB (NH 4 ) 2 SO 4, Na 2 SO 4, Na 3 PO 4 I – iontová síla

20 Použití vysolování (NH 4 ) 2 SO 4 Výhody Vysoká x, nezávislá na T Malý denaturační vliv Vysoká dělící schopnost frakční vysolování laciné Použití NK (30% (NH 4 ) 2 SO 4 ) BÍLKOVINY (30 – 75%) př. penicilinasa (60l →2,4kg, 4x specifická aktivita) Mastné kyseliny Sulfonové kyseliny

21 4.1.2 SRÁŽENÍ ORG. KAPALINOU Vytěsnění organickými rozpouštědly mísitelnými s vodou Zmenšení solvatačního obalu Aceton, EtOH, MeOH, py, pro bílkoviny polyethylenglykol

22 4.2. SRÁŽENÍ ZMĚNOU pH Bílkoviny  IEB (kasein z mléka) Adenin  Ade 2 S + NaOH

23 4.3. TVORBOU NEROZPUSTNÝCH KOMPLEXŮ NK (PO 4 - ) + SEPTONEX streptomycin sulfát Denaturace těžkými kovy – Hg 2+, Pb 2+, Cd TEPELNÉ SRÁŽENÍ Pro termostabilní enzymy – př. kvasničná ADH


Stáhnout ppt "DĚLICÍ METODY I. – úvod Význam DM– výskyt studovaných látek ve směsích Podmínka studia: Získat čistou látku Ověřit její čistotu."

Podobné prezentace


Reklamy Google