Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Průtoková cytometrie a její využití v rostlinné biosystematice, populační biologii a fyziologii rostlin J. Suda 1,2, P. Trávníček 2,1 1 Department of Botany,

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Průtoková cytometrie a její využití v rostlinné biosystematice, populační biologii a fyziologii rostlin J. Suda 1,2, P. Trávníček 2,1 1 Department of Botany,"— Transkript prezentace:

1 Průtoková cytometrie a její využití v rostlinné biosystematice, populační biologii a fyziologii rostlin J. Suda 1,2, P. Trávníček 2,1 1 Department of Botany, Faculty of Science, Charles University in Prague & 2 Institute of Botany, Academy of Sciences, Průhonice, Czech Republic

2 1 z 26 Principy FCM Průtoková komůrkaOptická část Základní předpoklady: Zdroj nejlépe monochromatického světla (laser, HBO lampa) Fluorescenčně značené partikule či chemické látky Znalost použitého fluorescenčního barviva (excitační a emisní maximum) Hardware a software schopný zpracovat výstupní signály

3 2 z 26 Principy FCM - třídění Zjištění parametrů konkrétní částice Vytvoření mikrokapiček pomocí piezoelektrického krystalu Nabití mikrokapiček nábojem dle vlastností obsažené partikule Vlastní třídění částic dle náboje

4 3 z 26 FCM v rostlinné biosystematice Základní východiska: nejčastěji analyzován celkový obsah DNA (ploidní úroveň, velikost genomu) využití fluorescenčních barviv s vazbou na DNA (DAPI – A-T specifická vazba, PI – interkalace) většinou jednoparametrická analýza (počet částic s určitou intenzitou fluorescence) velmi jednoduché cytometry a levné provozní náklady

5 4 z 26 Aplikace – taxonomie na základě ploidie Anthoxanthum 2x - A. alpinum 4x - A. odoratum Empetrum 2x - E. nigrum 4x - E. hermaphroditum Oxycoccus 2x - O. microcarpus 4x-6x - O. palustris x 4x Relative fluorescence Number of nuclei Relative fluorescence Number of nuclei

6 5 z 26 Aplikace – vzácné cytotypy Vaccinium - 3x Lythrum - 3x, 6x Campanula patula - 8x

7 6 z 26 Aplikace – heteroploidní křížení Empetrum - 3x Oxycoccus - 5x Galeobdolon - 3x

8 7 z 26 H. schultesii 2C=7.21 pg G2 H. aurantiacum 2C=7.80 pg Aplikace – taxonomie homoploidů Reynoutria Hieracium subg. Pilosella Determinace fragmentů rostlin, kořenů, …

9 8 z 26 Aplikace – homoploidní křížení Elytrigia repens x E. intermedia 2n = 42 Dryopteris carthusiana x D. dilatata 2n = 164

10 9 z 26 Aplikace – vnitrodruhová variabilita Taraxacum stenocephalum (2n = 32)

11 10 z 26 Aplikace – dedukování příbuznosti Cx-values for 4x cytotypes Hieracium subg. Pilosella „základní druhy“ „vedlejší druhy“

12 11 z 26 Aplikace – distribuce cytotypů 2x 4x 3x Empetrum Vaccinium uliginosum

13 12 z 26 4x 2x 3x Aplikace – distribuce cytotypů Krkonoše Empetrum 2x 2x + 3x 3x 4x * 100 m Mumlavská hora Jeřábí louka

14 13 z 26 Aplikace – sympatrický výskyt Oxycoccus 2x + 4x + 5x + 6x Campanula patula 2x + 4x Pimpinella saxifraga 2x + 4x Galeobdolon 2x + 3x + 4x   dynamika populací a demografické parametry   mechanismy reprodukční izolace   mezi a vnitro cytotypové interakce   ekologické a funkční aspekty polyploidie Gymnadenia 4x + 6x + 8x + 10x +12x Hieracium echioides 2x + 3x + 4x + 5x Vicia cracca 2x + 4x

15 14 z 26 Aplikace – rostlinné invaze Lythrum salicaria Vaccinium - 3x 2x 3x 4x 6x Reynoutria

16 15 z 26 Aplikace – ochrana rostlin Gymnadenia conopsea diverzita cytotypů Cerastium alsinifolium detekce míry introgrese 4x8x 6x, 10x, 12x

17 16 z 26 Aplikace – návaznost na jiné obory Juncus biglumis - fylogeneze 2C = 1.48 pg 2C = 1.39 pg

18 17 z 26 Determinace pohlaví Arecaceae Cannabaceae Caryophyllaceae Cucurbitaceae Loranthaceae Polygonaceae Silene latifolia 2n = 24 F – XX, M – XY

19 18 z 26 Analýza buněčného cyklu a) Kinetika BrdU – bromodeoxyuridine b) Synchronizace Zastavení buněčného cyklu v konkrétní fázi působením rozličných chemických látek Např. akumulace metafazických buněk pro třídění chromozómů Kořenový meristém Vicia faba

20 19 z 26 Brassica oleracea – různé stupně endopolyploidizace pletiv Endopolyploidie

21 20 z 26 Endopolyploidie u orchidejí Gymnadenia densifloraG. conopsea (2n = 40) G. conopsea (2n = 80) Taxon2C – ~4C~4C – ~8C Gymnadenia densiflora G. conopsea (2n = 40) G. conopsea (2n = 80)

22 21 z 26 Reprodukční způsoby

23 22 z 26 sexuálníapomiktické Reprodukční způsoby Taraxacum velká variabilita Hypericum

24 23 z 26 Reprodukční způsoby Ploidie potomstva: 6x (apomixie) 3x (haploidní partenogeneze) 5x (redukovaná gameta) 7x (redukovaná + nered. gameta) 8x (neredukovaná + red. gameta) semenáčkysemena Experimentální hybridizace: 6x fakultativní apomikt ( ♀ ) x 4x obligátní apomikt ( ♂ )

25 24 z 26 Po 1. roce Po 2 letech čerstvý materiál Metodika – herbářový materiál Oxycoccus

26 25 z měsíců – pokojová teplota 36 měsíců – -80°C (deep freezer) 2x 6x 5x 4x 2x6x5x4x Metodika – herbářový materiál

27 26 z 26 čerstvý materiál36-měsíců starý, DF Závěry:   rychlé sušení   uchování v – 80°C (deep freezer) Metodika – herbářový materiál

28 Děkuji za pozornost


Stáhnout ppt "Průtoková cytometrie a její využití v rostlinné biosystematice, populační biologii a fyziologii rostlin J. Suda 1,2, P. Trávníček 2,1 1 Department of Botany,"

Podobné prezentace


Reklamy Google