Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Svozilovi aneb jak vyšetřujeme Alportův syndrom Zpracovala: A. Lukášová a jiní.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Svozilovi aneb jak vyšetřujeme Alportův syndrom Zpracovala: A. Lukášová a jiní."— Transkript prezentace:

1 Svozilovi aneb jak vyšetřujeme Alportův syndrom Zpracovala: A. Lukášová a jiní

2 Co řekl Kubík Svozil Čtyřletý Kubík Svozil dostal v listopadu kašel a rýmu. „Mami, já asi čůrám pivo!“podivil se, když se podíval do nočníku. A opravdu, v nočníku bylo na dně trochu tekutiny a vypadala jak černé pivo. Asi čtrnáctka.

3 Co si řekla maminka Svozilová Řekla si: To budou ledviny! Kubík si nachladil ledviny!

4 A na co si maminka Svozilová vzpomněla Nejdřív si vzpomněla: Bratr Karel umřel na ledviny a bylo mu sotva 43 let! A ještě k tomu byl hluchý. A pak si vzpomněla: I mě zjistili krev v moči, ale maminka mi říkala, že to má taky a že to nic není. A měla pravdu – dožila se 86 let. Půjdeme k lékaři!!!

5 Co řekl nefrolog Nefrolog řekl: Kubík má v moči krev, ale funkce ledvin je v pořádku. Přesto soudím, že by to mohl být Alportův syndrom. ? A vysvětloval……………………………………………

6 Nefrologovo vysvětlení Alportův syndrom je porucha kolagenu IV v bazálních membránách ledvinných klubíček, v kůži, v oku a ve vnitřním uchu. Asi proto Váš bratr ohluchl a pak zemřel na selhání ledvin. Většinou je porucha v genu na chromozomu X, ženy porušený gen přenášejí, ale k selhání ledvin u nich nedochází. Vy i Vaše maminka jste sice měly krev v moči, ale funkce Vašich ledvin byla normální. U mužů může dojít k plnému rozvoji onemocnění – k hluchotě, poruchám vidění a selhání ledvin. Nemoc může potvrdit pouze vyšetření na patologii!

7 Jak se nakonec dohodli 1.Uděláme biopsii kůže a provedeme imunofluorescenční vyšetření řetězců kolagenu IV v bazální membráně epidermis a bude-li to nutné 2.Uděláme biopsii ledvin a provedeme totéž vyšetření v bazálních membránách glomerulů a ledvinných kanálků A jak řekli, tak udělali.

8 Jak to děláme my, laborantky Proti každému řetezci kolagenu IV je připravena protilátka. Standardně se vyšetřují řetezce 1,3,5 Protilátky jsou označeny fluorescenční látkou, která září v UV světle Pokud jsou řetězce kolagenu IV normální, protilátky se na ně navážou a místo, kam se navázaly září v UV světle Pokud nejsou řetězce kolagenu IV normální, protilátky se nemohou navázat a to vidíme jako výpadek, absenci záření

9 Pracovní postup K detekci kolagenu IV., který je podkladem Alportova syndromu, používáme kit od firmy Wieslab, který je na parafinové i kryostatové řezy Kit obsahuje 3 monoklonální protilátky po jednom ml. MAB 1, MAB 3, MAB 5 a 3 lahvičky s roztokem glycerin/urea, který je nutno uchovávat při teplotě -18°C, protože se urea při vyšších teplotách pomalu rozkládá

10 Řezání a fixace Čerstvě odebranou tkáň kůže nebo ledviny řežeme na zmrazovacím kryostatu a to na plusová skla. Tloušťka řezu je 5-10  a na každé sklíčko neřežeme cca 4 řezy. Preparáty necháme na vzduchu zaschnout a fixujeme 10 minut acetonem. Vymyjeme 2×5 minut v PBS pufru o ph 7,6.

11 Denaturace roztokem glycerin/urea Řez pro MAB 5 se před aplikací primární protilátky denaturuje inkubací ve studeném roztoku glycerin/urea po dobu 5 minut, následuje vymytí v destilované vodě 2×5 minut.

12 Primární protilátky Řezy inkubujeme 1 hodinu naředěnými protilátkami MAB 1 a MAB 3, pouze protilátka MAB 5 se inkubuje 1,5 hodiny. Protilátky ředíme do PBS pufru, doporučené ředění je 1:25 až 1:75, optimální výsledky jsou při ředění 1:25. Na každé sklíčko kapeme 100  l naředěné protilátky, inkubují se ve vlhké komůrce při pokojové teplotě. Následuje vymytí v PBS pufru, a to 2×5 minut.

13 Sekundární protilátka K samotné vizualizaci reakce použijeme protilátku Ig antimyší značenou FITC naředěnou 1:10 v PBS pufru, inkubujeme 1 hodinu ve vlhké komůrce při pokojové teplotě.

14 Oplach a montování Následuje oplach v PBS pufru 2×5 minut a montování do fluorescenčního montovacího média od DAKa, které zajistí stabilitu záření několik dní. Lékař prohlíží sklíčka ve fluorescenčním mikroskopu.

15 Jak to vidí patolog v kůži Kontrola MAB 1 Kontrola MAB 5 MAB 5, částečná pozitivita MAB 5, negativní Normální nálezPatologický nález MAB 1 je vždy pozitivní MAB 3 je v kůži vždy negativní Patologické změny u A-syndromu se týkají v kůži pouze MAB 5

16 Jak to vidí patolog v ledvině Kontrola MAB 1 Kontrola MAB 3, 5 g MAB 3 MAB 5 Normální nálezPatologický nález Patologické změny u A-syndromu v ledvinách se týkají MAB 3 i MAB 5. Projevují se kompletní nebo částečnou ztrátou pozitivity.

17 Jak je to s Jakubem Svozilem Bohužel, Jakub Svozil má Alportův syndrom a jeho maminka je přenašečkou porušeného genu. Podezření na toto onemocnění ukázala historie rodiny a potvrdila ho biopsie kůže a ledviny. Léčba tohoto onemocnění je obtížná, protože jde o poruchu genu. Je možné některé příznaky mírnit, ale účinná léčba je možná jen vnesením neporušeného genu do nemocné ledviny.

18


Stáhnout ppt "Svozilovi aneb jak vyšetřujeme Alportův syndrom Zpracovala: A. Lukášová a jiní."

Podobné prezentace


Reklamy Google